研究復方癌痛平膠囊的提取工藝

摘要：目的　優(yōu)選中藥臨床經(jīng)驗方癌痛平膠囊的最佳提取精制工藝。方法采用正交實驗法L9（34）分別以胡椒堿和重樓總皂苷的轉移率作為考察指標，優(yōu)選癌痛平膠囊的制備過程中提取工藝。結果最佳醇提取工藝為70%的乙醇回流提取兩次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量；最佳水提取工藝為煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量。結論該制備工藝穩(wěn)定、合理、可行。

關鍵詞： 復方癌痛平膠囊； 正交實驗法； 胡椒堿； 重樓總皂苷
　　
復方癌痛平膠囊為治療癌性疼痛的中藥新制劑，由蚤休、蓽茇和鼠婦等藥物組成，具有解毒祛淤、化痰通絡等功效。臨床主要用于治療各類癌性疼痛，總有效率為90%，療效肯定，已為臨床和藥效學實驗研究所證實。我們對原方采用醇提、水提等辦法，力求保持了原劑型水煎的特色，并經(jīng)精制除雜、在提取物中加適量輔料等工藝過程，精制成口服膠囊。具體實驗內(nèi)容分為兩大部分：①乙醇提取工藝的研究；方中主藥蓽茇，具有溫中散寒、下氣止痛等功效。據(jù)相關文獻報道，蓽茇果實含胡椒堿，棕櫚酸，四氫胡椒酸，揮發(fā)油等成分，其主要生理活性成分為胡椒堿［1］。另據(jù)文獻報道，蓽茇中胡椒堿為生物堿類化合物，幾不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸［2］，因此我們選擇乙醇對包括蓽茇在內(nèi)的幾味藥進行了提取預試，并應用高效液相色譜法對提取樣品中的胡椒堿進行了測定［3］。在確定胡椒堿轉移率合理的基礎上，進一步采用正交實驗，優(yōu)選最佳醇提取工藝［4～6］。②水提取工藝的研究；方中君藥蚤休（重樓），具有清熱解毒，消腫止痛等功效。據(jù)相關文獻報道，蚤休（重樓）主要藥效成分為重樓總皂苷［7］。另據(jù)文獻報道，蚤休中重樓皂苷一般可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇和熱甲醇，幾不溶或難溶于乙醚、苯等極性小的有機溶劑［8］，因此我們選擇水對包括蚤休在內(nèi)的幾味藥進行了提取預試，并應用紫外分光光度法對提取樣品中的重樓總皂苷進行了測定［9］。在確定重樓總皂苷轉移率合理的基礎上，進一步采用正交實驗，優(yōu)選最佳水提取工藝。
　　1 儀器與材料
　　1.1 儀器
　　美國Waters 515雙泵/2487檢測器高效液相色譜儀，Rheodyne進樣器。色譜柱：反相C18柱Hedera ODS-2，編號C1806091411 （中國科學院大連化學物理研究所制）。754型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）。
　　1.2 藥材
　　購于安徽省亳州市藥材公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定。蓽茇為胡椒科植物Piper longum L.的干燥成熟果穗；蚤休（重樓）為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.) Hara的干燥根莖。
　　1.3 對照品胡椒堿購自中國藥品生物制品檢定所，批號為0775-200203，供含量測定用。重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111590-200402、11591-200402，供含量測定用。
　　1.4 試劑甲醇為色譜純，水為二次重蒸水(自制)，其他試劑均為分析純，購自南京鵬程化學玻璃儀器有限公司。
　　2 方法
　　2.1 醇提取工藝
　　為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)醇提部分主要影響因素，確定實驗因素和水平。
根據(jù)表1，選擇L9(34)表正交進行實驗。表1 醇提工藝因素水平（略）
　　2.1.1 胡椒堿轉移率的測定色譜條件
　　流動相：甲醇-水（77:23），檢測波長343 nm，流速1.0 ml·min-1，靈敏度1.0 AUFS，柱溫30℃。
　　2.1.2 對照品溶液的制備
　　精密稱取胡椒堿對照品，加無水乙醇制成每毫升含100 μg的溶液，即得。
　　2.1.3 蓽茇藥材溶液的制備
　　本品中粉0.25 g，精密稱定，置于100 ml棕色容量瓶，加無水乙醇80 ml，超聲30 min，放置至室溫后，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過。
　　2.1.4 供試品溶液的制備
　　依照癌痛平膠囊方中醇提藥味處方量，稱取蓽茇等藥材160 g，共9份，按照表2進行正交實驗，得到9份乙醇提取液，靜置，取上清液，離心15 min，轉速12 000 r/min。吸取離心后的上清液1 ml，置于5 ml棕色容量瓶中，用流動相溶解稀釋至刻度，作為供試品溶液。表2 醇提工藝正交設計表（略）
　　2.2 水提取工藝為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)水提部分主要影響因素，確定實驗因素和水平。
根據(jù)表3，選擇L9（34）表正交實驗。表3 水提工藝因素水平（略）
　　2.2.1 重樓總皂苷轉移率的測定對照品溶液的制備
　　精密稱取重樓皂苷Ⅰ，Ⅱ對照品，分別加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的溶液，即得。
　2.2.2 蚤休藥材溶液的制備
　　稱取單味蚤休藥材50 g，加21倍量水，一次煎煮3 h，測體積，留樣。量取離心過的藥材水提液40 ml，用水飽和的正丁醇液萃取3次，30 ml/次，收集正丁醇液，蒸干，用95%乙醇定容于25 ml量瓶中。精密吸取0.2 ml，置具塞試管中，烘干，加入5%香草醛冰醋酸和高氯酸1 ml(1:4)，搖勻，密塞，85℃水浴20 min，冰浴5 min后，加入5 ml冰醋酸。放置110 min后，于465 nm下測定吸光度。
　　2.2.3 陰性溶液的制備
　　稱取除蚤休以外的其他各味藥各50 g，加21倍量的水，一次煎煮3 h，測體積，留樣。量取離心過的陰性水提液40 ml，按藥材溶液制備方法同法制得，測定吸光度。
　　2.2.4 供試品溶液的制備
　　依照癌痛平膠囊方中水提藥味處方量，稱取蚤休等藥材200 g，共9份，按照表4進行正交實驗，得到9份水提液，離心，靜置，量取40 ml，按藥材溶液制備方法同法制得，測定吸光度。表4 水提工藝正交設計（略）
　　3 結果
　　3.1 醇提工藝正交實驗結果見表5，方差分析結果見表6。表5 醇提工藝正交實驗數(shù)據(jù)及其計算分析結果（略）表6 醇提工藝方差分析結果（略）
從表6的方差分析結果可知，A因素是顯著性影響因素，B，C因素影響不是很明顯，由表5的直觀分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A選擇水平3，即乙醇濃度為7

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