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淺談病理制片中固定液的選擇
[論文關(guān)鍵詞]病理；固定液；甲醛；乙醇 [論文摘要]在病理組織診斷中制片過(guò)程尤為重要，而在病理制片的過(guò)程中組織的固定更為關(guān)鍵，故而對(duì)于石蠟切片，組織的固定則是必不可少的重要步驟。在多年的經(jīng)驗(yàn)中，筆者對(duì)AF、AAF及甲醛一生理鹽水三種混合固定液的優(yōu)劣進(jìn)行仔細(xì)分析、對(duì)比，從而認(rèn)為混合固定液與其他固定劑固定效果相比之下較為優(yōu)越。
由于病診斷是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是輔助臨床診斷的主要把關(guān)口，也是最后的宣判性診斷。做好病理診斷，層層步驟就顯得尤為重要，包括組織的取材，固定，脫水，浸蠟，包埋及染色。組織的固定是一個(gè)關(guān)鍵的過(guò)程，因?yàn)闆](méi)有好的固定就沒(méi)有好的制片，沒(méi)有好的制片就不會(huì)有好的成品，一張好的切片與固定有著密切的關(guān)系。
1 固定的目的
固定的概念是將采取的活體組織置于化學(xué)性溶媒(固定液)中，使其不發(fā)生自溶與腐化，保持被采取時(shí)的形態(tài)。
固定的目的是在于盡量使組織和細(xì)胞保持與生活時(shí)相仿的成分和形態(tài)，迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與腐化，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來(lái)，而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時(shí)，應(yīng)使用足量的固定液。其固定液的量一般小于組織塊總體積的4倍以上。
2 固定液的選擇
固定液必需要有較強(qiáng)的滲透能力，能迅速地滲入組織內(nèi)部，不會(huì)使組織過(guò)度收縮或膨脹，并且能使組織內(nèi)易觀察的成分可以凝固為不溶性物質(zhì)，能使組織達(dá)到一定的硬度，獲得較佳的折光率和對(duì)染料具有較強(qiáng)的親和力。組織細(xì)胞中不至于因固定引起人為的改變，因?yàn)樵谀淘|(zhì)以后，增加了細(xì)胞對(duì)于各種穿透的抵抗力，不至于因以后的處理而使固定后的原生質(zhì)變形，并盡可能地避免使組織膨脹或收縮，使細(xì)胞內(nèi)的成分(蛋白質(zhì))凝固沉淀下來(lái)，由正常的半液體狀(膠體)變?yōu)榘牍腆w狀(凝膠)，增加媒染作用和染色能力，使組織能夠得到充分的固定，便于以后的蠟塊保存。
固定液的種類很多，分為單純固定液和混合固定液，其中混合固定液比較常用。
2.1常用單純固定液
2.1.1甲醛(formaldehyde)為非沉淀性固定劑，是一種約有40％重量溶于水的氣體，易揮發(fā)，市售的為40％的甲醛水溶液，也稱為福爾**液(formalin)。此液久存自行分解，形成白色沉淀為副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。用于組織固定的濃度為10％，實(shí)際濃度含甲醛為4％。其固定液滲透能力很強(qiáng)，固定均勻，對(duì)組織收縮小，故而對(duì)于免疫組織化學(xué)標(biāo)本的制作常用此液。
2.1.2乙醇(alcoh01)即乙醇，為還原劑，無(wú)色液體，可與水無(wú)限相溶，固定兼脫水，用于固定的濃度為80％－95％。用于糖原、纖維蛋白及彈性纖維的固定，乙醇的滲透力較甲醛弱，能沉淀白蛋白、球蛋白。缺點(diǎn)為滲透能力相對(duì)較弱，且易揮發(fā)和吸收空氣中的水分，故而使用時(shí)應(yīng)蓋好容器；并對(duì)色素有破壞。
2.1.3醋酸(aceticacid)又名乙酸，為帶有刺激氣味的無(wú)色液體，低于15℃為冰醋酸，可溶于水，可較好地保持染色體結(jié)構(gòu)，把未分裂細(xì)胞核的染色質(zhì)沉淀為塊狀體，從而更清楚地顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。5％的醋酸pH 2－8，可抑制細(xì)菌和酶的活性，可防止自溶，缺點(diǎn)為組織膨脹較明顯，對(duì)于膠原纖維與纖維蛋白尤其明顯。一般很少單獨(dú)使用。
2.2常用混合固定液
2.2.1 AF液(乙醇+甲醛液)配方：95％乙醇或無(wú)水乙醇90ml+40％甲醛10ml。此液不但有甲醛的固定作用，并兼有脫水作用，用于固定肥大細(xì)胞和糖原，效果較好，米粒大小的胃鏡等標(biāo)本需要4－6h，其余外檢的大塊組織需用12－24h，其優(yōu)點(diǎn)是固定后可不經(jīng)水洗，直接放人95％E,醇繼續(xù)脫水，大大減少了脫水的過(guò)程和縮短了脫水時(shí)間，增加了工作效率。
2.2.2 AAF液(醋酸+乙醇+甲醛液)配方：95％E,醇或無(wú)水乙醇85 ml+醋酸5 ml+甲醛液10 ml。此液對(duì)染色質(zhì)固定較好，由于醋酸能使組織膨脹，因此可抵償因乙醇、甲醛等固定液引起的組織收縮和硬化，故常作為混合液而使用。AAF固定液的缺點(diǎn)是組織固定后對(duì)細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)有一定的破壞作用，而對(duì)免疫組織化學(xué)染色有一定的影響。
2.2.3甲醛－生理鹽水配方：甲醛液10 ml+生理鹽水90 ml。應(yīng)用較廣泛，pH為7，此液可用于保護(hù)脂類和細(xì)胞核。送檢組織標(biāo)本在手術(shù)切下或活檢離體后，細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，為保持細(xì)胞與生活時(shí)的形態(tài)相似，必需迅速滲入組織來(lái)固定原生質(zhì)。如果當(dāng)時(shí)沒(méi)有合適的固定液，可以浸泡在生理鹽水中保存。此液可保護(hù)類脂與細(xì)胞核，在酸性染色(如V-G染色)或三重染色之前可做二次固定。
3 小結(jié)
由于醇類對(duì)低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)的保存效果較差，解決的方法是與其他試劑混合使用，例如加冰醋酸、乙醇、氯仿、甲醛等。在病理中，現(xiàn)在很少單獨(dú)使用醛類、醇類等作為組織固定液，多數(shù)為混合固定液。根據(jù)以上比較，證明混合固定液為多種組織及細(xì)胞的良好固定液，且優(yōu)于單獨(dú)固定液及其他固定劑，根據(jù)不同組織的性質(zhì)及不同的工作狀態(tài)，在的實(shí)踐工作中可選用適宜的固定液。
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